ImPaqT:ゼブラフィッシュトランスジェネシスのためのゴールデンゲートベースの免疫ツールキット

• ゼブラフィッシュにおいて、ニックケース型PE2とヌクレアーゼ型PEnを用いたプライム編集により、プログラムされた短いDNA置換・挿入が実現された。
• ヌクレアーゼ型PEnが短いDNA改変において最大27.3%の精密挿入効率を達成した。
• プライム編集により導入された遺伝子改変が次世代に伝達されることが確認された。

線虫 C. elegans を用いたパイロットスタディにおいて、ゲノム全体にわたるタンパク質タグ付けの実現可能性が検証された。本研究では、3つの異なる蛍光タグを同時に導入し、30個の遺伝子座をタグ付けすることを目指した。発現レベルの異なる必須遺伝子を選択することで、遺伝子機能の破壊やタグ付けされたタンパク質の可視性に関する課題が検討された。このタグ付け手法は非常に効率的であり、タンパク質の発現および局在の予期せぬ細胞内・細胞小器官レベルでのパターンが明らかになった。本研究は、より多くの遺伝子座、最終的にはゲノム全体へのタグ付け手法のスケールアップを促進することが期待される。

• Cas9とER-Hoxb8を発現する好中球前駆細胞株を開発し、プール化CRISPRスクリーニングにより好中球分化に必須のCebpeやWASH複合体構成因子を同定した

ニトロ還元酵素(NTR)/プロドラッグシステムは、化学遺伝学的なツールとして、細胞除去の正確な時空間制御を可能にする。この技術は、細菌のNTR酵素を利用して不活性なプロドラッグを細胞毒性物質に変換し、標的細胞死を誘導する。当初はマウスで実装されたが、ゼブラフィッシュで最適化・応用され、現在ではショウジョウバエ、イソギンチャク、ツメガエル、メダカ、ラットなど他のモデル生物にも応用が拡大している。このシステムは、パーキンソン病、網膜変性、脱髄疾患、腎臓病など、様々なヒト疾患のモデリングに利用され、疾患の病態生理をin vivoで研究するための貴重なプラットフォームを提供する。また、NTR除去の精…

• COVID-19 mRNAワクチンの課題を解決する安価な圧電エレクトロポレーター「Piezopen」が開発された
• Piezopenは、裸RNAの遺伝子発現と免疫原性を増強し、低用量で脂質ナノ粒子(LNP)と同等の応答を達成
• 全身性炎症や反応性がない状態で皮膚標的送達を実現し、mRNA、saRNA、circRNAなど多様な構築物に対応